目前，乙肝五项的检测方法有三大类，一类是定性检测，另外两类是半定量检测和定量检测。
一、定性检测
定性检测有国产乙肝金标法或者采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法。定性检测的结果是告诉个体体内有没有乙肝表面抗原、乙肝表面抗体等指标。这种方法简单、快速，成本较低，但是不够精确灵敏，不能定量。特别是低浓度的标本，有时会漏诊，因为没有数值就无法动态观察疗效、评价治疗效果。目前临床上定性检测已经不常用，现其主要用于体检筛查等。对于乙肝患者来讲，尽量使用半定量和定量的检测方法，其结果能较为清楚地反应疾病的变化过程，为判断预后提供依据。
二、半定量检测
半定量和定量的检测方法就是化验单上标注的微粒化学发光法、电化学发光法等。酶联免疫吸附法-ELISA法也可以进行半定量的检测。半定量检测化验单上的单位是COI或者S/CO，它是一个数值，其主要原理是将测得的光密度结果（OD值）与一个临界值（CUT OFF值）对比，比值越高代表乙肝表面抗原或者乙肝表面抗体等越高。半定量检测在一定范围内可比性较好，灵敏性、准确性比定性的检测方法要高，可以大致反映抗原抗体的水平。但是检测的比值结果不是精确的数字，也没有线性关系，因此称为半定量。
三、定量检测
目前应用比较多的是定量检测方法，其灵敏度、特异性好，主要针对乙肝表面抗原和抗体。例如HBsAg使用的单位是IU/mL，正常参考值是<0.05IU/mL。定量检测的结果相对稳定，因此其有很好的可比性。目前采用的试剂主要是以进口为主，不同厂家的试剂检测范围有所不同。检测过程借助仪器设备完成，其自动化程度很高，可以对标本进行自动稀释，减少人为误差。不过由于试剂不同、批次不同，定标也不同，小范围的波动意义不大。此外，检测结果的COI值和定量结果之间没有稳定的换算关系。
定量检测不仅可以很好地反映乙肝患者体内病毒的变化以及抗病毒治疗的效果，而且能够预测远期疗效。例如HBsAg水平越低，反映体内的ccc DNA、HBV DNA水平都比较低；抗病毒治疗中HBsAg 水平下降越快，提示远期预后较好；根据HBsAg的变化也可以预测HBeAg血清转换率。因此，定量检测方法被越来越多地应用于接受抗病毒治疗的患者。
HBsAg的定量检测可以反映HBV DNA的水平，但它还不能代替HBV DNA的检测。临床上可以对HBV DNA进行定量检测——通过实时荧光定量聚合酶链反应PCR测定HBV DNA。进口试剂的检测下限是小于20 IU/mL，国产试剂在临床的应用也比较多，但标准低于进口试剂。PCR检测方法先进，形式多种，如反转录聚合酶链反应RT-PCR可以对HCV RNA进行定量检测。通过这种方法还可以进一步进行核酸序列的测定，检测病毒基因型以及是否有耐药基因的发生、乙肝病毒前C区的变异等。
定量检测不仅能够动态反映疾病的自然过程以及抗病毒治疗的应答情况，而且可以预测疗效，为是否停药提供依据，因此受到了临床医师的重视，成为目前临床应用多的方法。
